L-02|人肝细胞
L-02|人肝细胞培养细胞的常规观察:
细胞接种或传代以后,实验者每天或至多间隔1~2d,要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化,做换液或传代处理,如发现异常情况应及时采取措施。
检测原理:
细胞发生凋亡或坏死,其细胞DNA均发生断裂,细胞内小分子量DNA增加,高分子DNA减少,胞质内出现DNA。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间,出现180-200bpDNA,而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。
检测步骤:
1.将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体
2.在微定量板上吸附组蛋白体
3.加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合
4.加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合
5.加酶的底物,测光吸收制
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