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人II型胶原(Collagen Type II)ELISA Kit 说明书

人II型胶原(Collagen Type II)ELISA Kit 说明书

型号:

更新时间:2017-11-07

简要描述:

素尔生物主营产品:Elisa试剂盒,胎牛血清,Hyclone 胎牛血清,Gibco胎牛血清,PAA胎牛血清,SCL胎牛血清,细胞株细胞系,人正常细胞,人肿瘤细胞,动物正常细胞,动物肿瘤细胞等,所有产品均八折优惠,欢迎您来电素尔生物!!

详细介绍

II型胶原(Collagen Type II)ELISA  Kit 说明书
本试剂盒仅供研究使用
预期应用
ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中Collagen Type II含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中Collagen Type II水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Collagen Type II抗原、生物素化的抗人Collagen Type II抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的Collagen Type II呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 
试剂盒组成及试剂配制 
1. 酶联板:一块(96孔) 
2. 标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为10000 pg/mL,做系列倍比稀释后,分别稀释成10000 pg/mL5000 pg/mL 2500 pg/mL1250 pg/mL625 pg/mL312.5 pg/mL156 pg/mL,其原液直接作为zui高标准浓度,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/mL,临用前15分钟内配制。
如配制5000 pg/mL标准品:取0.5ml 10000 pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液:1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A1×120ul/瓶(1100)临用前以检测稀释液A 1100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B1×120ul/瓶(1100)临用前以检测稀释液B1100稀释。稀释方法同检测溶液A
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 
标本的采集及保存 
1.细胞培养物上清:请离心后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。
2.血清:标本请于室温放置2小时或4℃一夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
各试剂在使用前平衡至室温。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外,余孔分别加标准溶液或待测样品100ul,注意不要有气泡,轻轻混匀,酶标板加上盖,37℃反应120分钟。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。
3. 每孔加检测溶液A工作液 100ul37,60分钟。洗板3次,350ul/每孔,甩干。 
4. 每孔加检测溶液B工作液 100ul37℃,60分钟,洗板5次,甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul37℃避光显色30分钟(此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显)。
6. 依序每孔加终止溶液50ul,终止反应(此时兰色立转黄色)。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 
注:
1 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 
2.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
特异性
    本试剂盒可同时检测重组或天然的人Collagen Type II,且与其它相关蛋白无交叉反应。计算以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 
注意事项
1 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
2 一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
3 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。
4 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。
5.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
6.底物请避光保存。
检测范围:
156 pg/mL -10000 pg/mL
说明 
1. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染,试剂避免受到微生物的污染,因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
2. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的预孵育时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且,洗涤不充分将影响试验结果。
3. 试剂盒保存:部分试剂保存于-20℃,部分试剂保存于2-8℃,具体以标签上的标示为准。
4. 浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 
5. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。 
6. 中、英文说明书可能会有不*之处,请以英文说明书为准。
7. 所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
8. 有效期:6个月

素尔生物经营各种Elisa试剂盒,种属包括:人,鼠,牛,样,鸡,鸭,豚鼠,鱼,猪等,品种齐全,价格优惠。欢迎点击:http://www.tnxq.net/

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