手机:17721477003
产品展示

您现在的位置:>首页  >  产品展示 > Elisa试剂盒 > 人Elisa试剂盒 >人可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1) ELISA试剂盒说明书

人可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1) ELISA试剂盒说明书

人可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1) ELISA试剂盒说明书

型号:

更新时间:2017-10-10

简要描述:

素尔生物专业供应优质人可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1) ELISA试剂盒说明书 。品质保证,价格优惠。本公司所销售的Elisa试剂盒,种属齐全,专一性强,灵敏度高,素尔生物作为全国Z优秀的Elisa试剂盒供应商,竭诚为您服务!

详细介绍

人可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1) ELISA试剂盒说明书 

本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!

预期应用

ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中sICAM-1含量。

实验原理

用纯化的sICAM-1抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的sICAM-1抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的sICAM-1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度( 值),计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1 酶标板:一块(96孔)

2 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为5,000 pg/ml,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成5,000 pg/ml2,500 pg/ml1,250 pg/ml625 pg/ml312 pg/ml156 pg/ml78 pg/ml,样品稀释液直接作为空白孔 0 pg/ml。如配制2,500 pg/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml 5,000 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3 样品稀释液1×20ml

4 检测稀释液A1×10ml

5 检测稀释液B1×10ml

6 检测溶液A1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液1:100稀释(如:10 检测溶液A / 990 检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100/孔),实际配制时应多配制  0.1-0.2ml

7 检测溶液B1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液1:100稀释。稀释方法同检测溶液A

8 底物溶液1×10ml/瓶。

9 浓洗涤液1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10终止液1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。

11覆膜5

12使用说明书:1

自备物品

1 酶标仪(建议仪器使用前提前预热)

2 微量加液器及吸头,EP

3 蒸馏水或去离子水,滤纸

标本的采集及保存

1 血清:全血标本请于室温放置2小时或4 一夜后于1000 g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 -80 保存,但应避免反复冻融。

2 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于 1000 g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 -80 保存,但应避免反复冻融。

3 其它生物标本:请1000 g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 -80     存,但应避免反复冻融。

4 样本处理:血清或血浆标本推荐稀释100倍,如:稀释100倍,取10uL血清或血浆加入990uL样品稀释液。标本使用0.1 M PBS稀释( PH=7.0-7.2)。

注:以上标本均应密封保存,4 保存应小于1周,-20 不应超过1个月,-80 不应超过2个月;标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤

实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在37 溶解;试剂或样品配制时,均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ,余孔分别加标准品或待测样品100 ,注意不要有气泡,加样 时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37 温育2小时。为保证实验结果有效

性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100 (临用前配制),酶标板加上覆膜,37 温育1小时。

3 弃去孔内液体,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分钟,大约400 /每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4 每孔加检测溶液B工作液(临用前配制)100 ,加上覆膜,37 温育1小时。

5 弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤3

6 每孔加底物溶液90 ,酶标板加上覆膜37 避光显色(反应时间控制在15-30分钟,当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显时,即可终止)。

7 每孔加终止溶液50 ,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物    液的加入顺序相同。

8 立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度( 值)。

 

1 试剂准备:所有试剂在使用前应平衡至室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

2 加样:加样或加试剂时,*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预温育”时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。

3 温育:为防止样品蒸发,实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的温育时间和温度。

4 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响zui后的酶标仪读数。

5 试剂配制:Detection ADetection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配制使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请精确配制标准品及工作液,尽量不要微量配制(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10 ),以避免由于不准确稀  释而造成浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液。

6 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。   

洗板方法

1 手工洗板方法:将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;根据需要,重复此过程数次。

2 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

特异性

    本试剂盒可同时检测重组或天然的人sICAM-1,且与其它相关蛋白无交叉反应。

计算

  各标准品及样本 值扣除空白孔 值后作图(七点图),如设置复孔,则 应取其平均值计算。以标准品的浓度为纵坐标(对数坐标), 值为横坐标(对数坐标),在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如 curve expert 1.3,根据样品 值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

检测范围:78 pg/ml - 5,000 pg/ml,绘制标准曲线请取用以下浓度值:5,000 pg/ml2,500 pg/ml1,250 pg/ml625 pg/ml312 pg/ml156 pg/ml78 pg/ml

zui低检测限19.5 pg/ml

 素尔生物经营各种Elisa试剂盒,种属包括:人,鼠,牛,样,鸡,鸭,豚鼠,鱼,猪等,品种齐全,价格优惠。欢迎点击:http://www.tnxq.net/

:/

 

 

 


产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 留言内容:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 详细地址:

  • 省份:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
在线客服 联系方式 二维码

服务热线

15821734033

扫一扫,关注我们