AML12细胞，小鼠肝细胞

AML12细胞，小鼠肝细胞  细胞复苏方法：

细胞原理在不加任何条件下直接冻存细胞时，AML12细胞，小鼠肝细胞 内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞zui易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。 目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。

1.冻存 

1、消化细胞（同实验二），将 悬液收集至离心管中。 

2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。 

3、沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。 

4、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。 

5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。 

6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。 

7、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。  注意：操作时应小心，以免液氮冻伤。液氮定期检查，随时补充，不能挥发干净，一般 30立升的液氮能用1～1.5月。 

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