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人子宫颈癌细胞

人子宫颈癌细胞

型号:

更新时间:2018-03-16

简要描述:

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详细介绍

人子宫颈癌细胞  详细描述:

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、建立细胞系(或株)的要求
什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞,视具体情况而定,无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一,取材部位及组织种类等条件稳定即可,如用做长期培养,特别是反复传代的细胞,常需做如下说明:
1、组织来源:细胞供体所属物种,来自人体或者动物;
个体性别、年龄;取材的器官或组织。
如系肿瘤组织,应说明临床和病理诊断,以及病历号等。
2、细胞生物学检测:
了解细胞一般和特殊的生物学性状,如细胞一般形态,特异结构,细胞生长曲线和分裂指数,倍增时间,接种率等。
如为肿瘤细胞,为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性,须做软琼脂培养,异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。
3、培养条件和方法;应说明细胞系(或株)适应的生存环境,即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。
、若干细胞建株的要点及基本过程

(一)肿瘤细胞培养技术要点
1、取材:材料主要来源于外科手术或活检瘤组织,取材时避免用坏死组织,要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位,瘤性转移淋巴结或胸腹水是较好的培养材料。取材后尽快培养,因故不能立即培养者,可冻存。其培养方法及冻存方法同前述正常组织。
2、成纤维细胞排除:在肿瘤组织中常混杂有一些成纤维细胞,培养时能与瘤细胞同时生长,并常压过癌细胞,导致癌细胞生长受阻以至消失,应仔细排除。
排除方法常有:机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法、胶原酶消化法等。
3、提高肿瘤细胞培养存活率和生长率
根据实验经验,肿瘤细胞在体外不易培养,建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。一般当肿瘤组成或细胞被原代培养后,要经过对新环境的适应才能生长,因此不能局限于一般培养法,须采用一些特殊措施。如:用适宜底物,鼠尾胶原底层及饲细胞底层等。用细胞生长因子,根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子,如胰岛素,雌激素等。也可以考虑动物媒介培养。
(二)人类淋巴母细胞建株方法
l、4ml肝素抗凝血于离心管中,加入2ml RPMI 1640。
2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min。
3、1500rpm,15min,吸取白细胞层(第二层)于另一离心管中。
4、加RPMI 1640 5ml洗涤白细胞两次。
5、将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中,加入10μl环胞霉素和100μl的EBV(EB病毒)液,混匀。
6、水浴摇床,40次/分,37℃,3hr。
7、1500rpm,15min。将细胞接种至1ml培养基中(内含谷氨酰胺1mM/ml)加入10μl环胞霉素,轻轻混匀,37℃培养。
8、5天后观察细胞转化和生长情况,决定是否半量换液。一般半量换液l—2次,并维持环胞霉素的浓度。
9、待转化细胞数量明显上升,并出现细胞团块后,可转入25ml细胞培养瓶中,加1—2ml培养基,37℃培养10—15天,一般每隔3—4天观察一次,决定是否换液,传代。

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