CRL-9096CHO中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞系

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CRL-9096 CHO/dhFr-（中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞系）遵循慢冻快溶的原则：1）融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。2）冻存：阶梯温度冻存：分别经过4度，-20度，-80度和液氮的依次过程进行冻存，可以zui大限度的保存细胞活力。

一. 实验前准备：

1.将水浴锅预热至37℃

2.用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

二．取出冻存管：

1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

2.从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。

三．迅速解冻：

1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。

2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。

四.平衡离心：用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3min 

五.制备细胞悬液：

1.吸弃上清液。

2.向离心管内加入10ml培养液，吹打制成细胞悬液。

六.细胞计数：细胞浓度以5×105/ml为宜。

七.培养细胞：

将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃5％CO2的培养箱内2-4小时（或者24-48小时）后换液继续培养培养，换液的时间由细胞情况而定。

初学者易犯错误：

1水浴锅未预热或者未预热到37℃。

2.水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。

3.离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。

4.一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。