WI-38细胞*人胚胎肺成纤维细胞

关键词：WI-38细胞*人胚胎肺成纤维细胞

产品简介：我公司主要经营Elisa试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、血清、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高，

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产品详情：

规格：96T/48T

保存条件：2-8℃

厂商：试剂销售

用 途：用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中人28S抗核糖体抗体（28S rRNP） 的含量。

标本的采集及保存

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

WI-38细胞*人胚胎肺成纤维细胞  Elisa试剂盒操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

说明

1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不*之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

WI-38细胞*人胚胎肺成纤维细胞 选择正规的试剂盒产品，实验会做的相当成功，效率也是事半功倍，选择的不合适，对于实验来说，可能是一场灾难，您也许要为此要浪费时间、精力，严重的会打击您的自信心......），

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　　atcc细胞代理，

　　*培养基：DMEM高糖培养基90%;胎牛血清10%。

　　培养条件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%

　WI-38细胞*人胚胎肺成纤维细胞 细胞株传代方法：

　　收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。 (一)如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个 瓶消毒后放到超菌 台内，严格无菌操作，打开血管平滑肌细胞瓶，吸出培养液，仅留下 10ml培养液在瓶内继续培养。

　　(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

　　1. 弃去培养液，用PBS(不含钙，镁离子)洗1-2次。

　　2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中， 倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将 培养瓶倒转大约30 秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分 散，轻敲几下培养培养瓶， 细胞随即脱落下来。

　　3. 加入6-8ml*培养基，吸出，分到新的培养瓶中。1:3~1:6 传代;2~3天1次。

　　注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细 胞不适应而造成生长不好。

　　冻存方法：冻存液：基础培养基 +5%DMSO+20%FBS

　　储存：液氮储存

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