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热卖细胞,ND7/23细胞,大鼠神经母细胞

热卖细胞,ND7/23细胞,大鼠神经母细胞

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更新时间:2019-08-16

简要描述:

热卖细胞,ND7/23细胞,大鼠神经母细胞简介:全国统一价格,全国各地均可发货,远到香港、澳门、福建、新疆、内蒙古等地。

详细介绍

热卖细胞,ND7/23细胞,大鼠神经母细胞简介:全国统一价格,全国各地均可发货,远到香港、澳门、福建、新疆、内蒙古等地。

产品名称热卖细胞,ND7/23细胞,大鼠神经母细胞

细胞规格

质控标准:无支原体、无污染、符合标准

运输方式:新鲜运输和冻存管运输

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质粒的相关知识
一.如何阅读质粒图谱
*步:首先看 Ori 的位置,了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒)。
第二步:再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记。
--Ampr   水解β-内酰胺环,解除氨苄的毒性;
--tetr   可以阻止四环素进入细胞;
--camr   生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性;
--neor(kanr)氨基糖苷磷酸转移酶 使G418(长那霉素衍生物)失活;
--hygr   使潮霉素β失活。
第三步:看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点,便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活,从而便于筛选。MCS决定了能不能放置目的基因以及如何放置目的基因。
第四步:再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA段。一般来说,外源DNA段越长,越难插入,越不稳定,转化效率越低。
第五步:是否含有表达系统元件,即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号,这是用来区别克隆载体与表达载体。在克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用哪种载体,要以实验目的为依据。
二.如何选择载体
把目的基因通过基因工程手段送到生物细胞(受体细胞),需要运载工具(交通工具)携带外源基因进入受体细胞,这种运载工具就叫做载体(vector)。基因工程所用的vector实际上是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA。
选择载体主要依据构建的目的,同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因,则要选择合适的表达载体。
,载体选择主要考虑下述3点:
1. 构建DNA重组体的目的:克隆载体/表达载体。
2. 载体的类型:
克隆载体的克隆能力:根据克隆片段大小(大选大,小选小)。如<10kb选质粒。
表达载体:根据受体细胞类型:原核/真核/穿梭,E.coli/哺乳类细胞表达载体。
原核表达载体要选择合适的启动子及相应的受体菌;表达真核蛋白时需注意阅读框错位问题;表达天然蛋白和融合蛋白所需载体亦有区别。
3. 选用质粒做载体的4点要求:
(1)选分子量小的质粒,即小载体(1-1.5kb):不易损坏,在细菌里面拷贝数也多(也有大载体);
(2)一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束,一般10个以上的拷贝,而严谨型质粒<10个。
(3)必需具备一个以上的酶切位点,有选择的余地;
(4)必需有易检测的标记,多是抗生素的抗性基因。
无论选用哪种载体,首先都要获得载体分子,然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割,获得载体片段,以便于与目的基因片段进行连接。

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