特惠STR鉴定|人脐静脉内皮细胞（HUVEC-C）

特惠STR鉴定|人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

细胞名称：人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

培养条件：Sciencecell ECM+10%特级胎牛血清（推荐S-FBS-AU-015）

细胞来源：ATCC细胞库

代数：P3代细胞

人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

一、传代：

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，*次传代比例为1:2；

3.传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（*次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为好消化时间，记录好消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

二、保存：

冻存条件：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液HAKATA（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)

保存条件：液氮存储

人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)细胞在生存过程中经历以下三个阶段：

　　1.原代培养期(primary culture)

　　组织到*次传代时间大约为1～4周

　　特点：

　　细胞活跃移动,分裂,但不旺盛多呈二倍体核型。

　　原代与体内原组织形态结构和功能活动基本相似。

　　各细胞的遗传性状互不相关，细胞相互依存性强，如果把这种稀释分散成单细胞,在软琼脂培养基中进行培养细胞克隆的形成率(cloning efficiency)下降，表明细胞独立生存性差。

　　2.传代期(passage)

　　初代培养细胞一经传代便称之为细胞系(cell line)

　　特点：

　　细胞增殖旺盛，并维持二倍体核型，也叫二倍体细胞系(diploid cell line)为了保存二倍体细胞性质，细胞应在初代或传代早期冻存为好。

　　一般细胞在10代以内冻存。

　　冻存配方：

　　向培养液加入保护剂二甲基亚砜(DMSO)或甘油,封入安瓶中。

　　存于在液氮中温度可达到-196℃，可长期储存。如解冻后细胞复苏，仍能继续增殖生长，细胞性状不受影响，成为保存细胞最主要的手段。

　　3.衰退期

　　特点：细胞仍生存 增殖减慢 不增殖 轮廓增强 衰退凋亡

　　注意：细胞在三期中的任何一期(一般发生在传代后期或衰退期)在某些因素影响下,如血清质量不佳、病毒污染、温度和pH不稳等,细胞可能发生自发转化(spontaneous transformation);

细胞可能获得永生性(immortality) 或称为恶性性(malignancy)。细胞获得持久性的增殖能力,这样的细胞群体称为连续细胞系(continuous cell line)。而细胞获得不死性后,细胞核型大多变成异倍体(heteroploid)接触抑制消失。

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特惠STR鉴定|人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)细胞培养过程中，可能遇到几个问题：

1、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察微生物培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，微生物培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;

(2)血清质量不好，反复冻融的结果;

(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;

(4)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

2、EDTA在细胞消化过程中起什么作用?

EDTA是一种螯合剂，它可以螯合Ca2+ 或Mg2+，而细胞表面很多和培养皿或培养瓶结合的蛋白都是带有Ca2+ 或Mg2+的，把这些离子螯合后，可以加速细胞和培养皿的脱离，促进消化。上皮类细胞的连接存在“桥粒”结构，是细胞间最“牢固”的连接，但桥粒的形成依赖于钙离子的存在。在胰酶消化细胞时，加入EDTA，可以破坏细胞的桥粒结构，使细胞能够分散成单个细胞。通俗地说，就是破坏细胞间的粘连。

3、如何选用特殊细胞系培养基?

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。*选择DMEM做贴壁细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养。另外还可以参考ATCC网站的推荐信息。

4、怎样让细胞适应新的条件?

从原条件逐渐过度：1/4、1/2、3/4，最后是完全新培养基。

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