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特惠STR鉴定|人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

特惠STR鉴定|人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

型号:HUVEC-C

更新时间:2019-04-30

简要描述:

细胞名称:人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

培养条件:Sciencecell ECM+10%特级胎牛血清(推荐S-FBS-AU-015)

细胞来源:ATCC细胞库

代数:P3代细胞特惠STR鉴定|人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C),素尔特惠.......

详细介绍

特惠STR鉴定|人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

细胞名称:人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

培养条件:Sciencecell ECM+10%特级胎牛血清(推荐S-FBS-AU-015)

细胞来源:ATCC细胞库

代数:P3代细胞

人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)

一、传代:

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代;

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,*次传代比例为1:2;

3.传代步骤:将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(*次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为好消化时间,记录好消化时间,以便于下次消化),消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。

二、保存:

冻存条件:80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注:建议使用本公司的冷冻液HAKATA(H-W-100),用4度保存的冷冻液直接重悬细胞,不能预热后使用。)

保存条件:液氮存储

人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)细胞在生存过程中经历以下三个阶段:

  1.原代培养期(primary culture)

  组织到*次传代时间大约为1~4周

  特点:

  细胞活跃移动,分裂,但不旺盛多呈二倍体核型。

  原代与体内原组织形态结构和功能活动基本相似。

  各细胞的遗传性状互不相关,细胞相互依存性强,如果把这种稀释分散成单细胞,在软琼脂培养基中进行培养细胞克隆的形成率(cloning efficiency)下降,表明细胞独立生存性差。

  2.传代期(passage)

  初代培养细胞一经传代便称之为细胞系(cell line)

  特点:

  细胞增殖旺盛,并维持二倍体核型,也叫二倍体细胞系(diploid cell line)为了保存二倍体细胞性质,细胞应在初代或传代早期冻存为好。

  一般细胞在10代以内冻存。

  冻存配方:

  向培养液加入保护剂二甲基亚砜(DMSO)或甘油,封入安瓶中。

  存于在液氮中温度可达到-196℃,可长期储存。如解冻后细胞复苏,仍能继续增殖生长,细胞性状不受影响,成为保存细胞主要的手段。

  3.衰退期

  特点:细胞仍生存 增殖减慢 不增殖 轮廓增强 衰退凋亡

  注意:细胞在三期中的任何一期(一般发生在传代后期或衰退期)在某些因素影响下,如血清质量不佳、病毒污染、温度和pH不稳等,细胞可能发生自发转化(spontaneous transformation);

细胞可能获得永生性(immortality) 或称为恶性性(malignancy)。细胞获得持久性的增殖能力,这样的细胞群体称为连续细胞系(continuous cell line)。而细胞获得不死性后,细胞核型大多变成异倍体(heteroploid)接触抑制消失。

人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)上海素尔生物专业专注胎牛血清8年,一直秉承客户至上,诚信为本的原则, 我司现货供应超低IgG,碳吸附,热灭活,透析型FBS。适养于神经细胞,癌细胞,干细胞,原代细胞,肌肉成纤维细胞 ,胚胎干细胞等。众多血清品牌,众多血清类型,总有一款适合您的细胞!我们有专业的技术团队,可以帮您选择较适合的胎牛血清,详情咨询。

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特惠STR鉴定|人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)细胞培养过程中,可能遇到几个问题:

1、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察微生物培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,微生物培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:

(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;

(2)血清质量不好,反复冻融的结果;

(3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;

(4)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。

2、EDTA在细胞消化过程中起什么作用?

EDTA是一种螯合剂,它可以螯合Ca2+ 或Mg2+,而细胞表面很多和培养皿或培养瓶结合的蛋白都是带有Ca2+ 或Mg2+的,把这些离子螯合后,可以加速细胞和培养皿的脱离,促进消化。上皮类细胞的连接存在“桥粒”结构,是细胞间“牢固”的连接,但桥粒的形成依赖于钙离子的存在。在胰酶消化细胞时,加入EDTA,可以破坏细胞的桥粒结构,使细胞能够分散成单个细胞。通俗地说,就是破坏细胞间的粘连。

3、如何选用特殊细胞系培养基?

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。*选择DMEM做贴壁细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养。另外还可以参考ATCC网站的推荐信息。

4、怎样让细胞适应新的条件?

从原条件逐渐过度:1/4、1/2、3/4,后是完全新培养基。

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